BUNSEN快訊：ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)怎樣才能減少實(shí)驗(yàn)誤差

　　ELISA試劑盒試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。ELISA檢測(cè)試劑盒是用于體外定性檢測(cè)人血清或血漿中的抗人類(lèi)戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測(cè)。

　　減少ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)誤差的方法包括以下幾個(gè)方面?：

　　?操作細(xì)節(jié)的注意?：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中盡量少說(shuō)話，防止唾液掉進(jìn)酶標(biāo)條中;加入一抗二抗需要放入37°C;如果同時(shí)做多個(gè)板子，多個(gè)板子不要疊放在一起;盡量少用排槍;加樣時(shí)，由低濃度向高濃度加，這樣可以減少跳孔的幾率;勤換槍頭?。

　　?移液器的使用規(guī)范?：確保移液槍的準(zhǔn)確性，誤差不能超過(guò)2%?？梢允褂盟碗娮犹炱竭M(jìn)行確定，但有專(zhuān)業(yè)人員進(jìn)行矯正。吸取不同的液體后，要更換槍頭，即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)也要更換?。

　　?試劑的保存和使用?：試劑盒中的所有試劑應(yīng)按說(shuō)明書(shū)中要求儲(chǔ)存。開(kāi)始使用試劑盒時(shí)，確保所有試劑已預(yù)先平衡至室溫(除非特殊溫度要求)。如不打算一次性用完整個(gè)試劑盒試劑，只準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)當(dāng)天所需的試劑，因?yàn)楹芏嘣噭┦且?0X或其它濃縮母液提供，大部分試劑盒僅測(cè)試母液狀態(tài)下的穩(wěn)定性?。

　　?實(shí)驗(yàn)操作的具體步驟?：

　　?試劑平衡?：實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定。

　　?底物避光保存?：實(shí)驗(yàn)時(shí)，底物要避光保存。

　　?吸取液體速度?：用槍吸取液體時(shí)速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。

　　?加樣技巧?：將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí)，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會(huì)自然流下去。液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒，混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能?。

　　?溫浴和洗板?：溫浴時(shí)要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板，防止水分的蒸發(fā)。洗板時(shí)，每次洗液加入后應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加干凈。沒(méi)有洗板機(jī)時(shí)，倒去液體后，要將酶標(biāo)板在吸水紙上用力拍干?。

　　?樣本處理和保存?：

　　?血清和血漿?：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，然后1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)。或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融?。

　　?組織勻漿?：用預(yù)冷的PBS沖洗組織，去除殘留血液后，將組織剪碎并與對(duì)應(yīng)體積的PBS加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。最后將勻漿液離心取上清檢測(cè)?。

　　?細(xì)胞培養(yǎng)物上清?：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)?；?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融?。

　　通過(guò)以上方法，可以有效減少ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中的誤差，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

　　除了以上幾點(diǎn)之外，以下的小細(xì)節(jié)也會(huì)幫您減少實(shí)驗(yàn)誤差：

　　1.做實(shí)驗(yàn)時(shí)少說(shuō)話，防止唾液掉進(jìn)酶標(biāo)條中。

　　2.加入一抗二抗需要放入37°。

　　3.如果同時(shí)做多個(gè)板子，多個(gè)板子別羅一起;盡量少用排槍。

　　4.加樣時(shí)，由低濃度向高濃度加，這樣減少跳孔的幾率。

　　5.勤換槍頭。

　　注：以上僅供參考，本試劑僅供科研使用，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢(xún)技術(shù)老師。

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